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Contenido lipídico en embriones bovinos in vitro PDF Imprimir Correo

Actualmente los métodos más utilizados para efectuar la crio preservación de los embriones son: la congelación convencional y la vitrificación. La primera es considerada la técnica de elección para la crio preservación de embriones bovinos producidos in vivo, para este tipo de embriones la congelación convencional ha permitido obtener resultados ligeramente inferiores a los registrados con embriones en frasco (in vitro).

 

La segunda, denominada vitrificación es una técnica de congelación celular avanzada, se utiliza para congelar ovocitos o embriones y garantiza una tasa de supervivencia superior al 80%. La producción in vitro constituye una herramienta interesante, capaz de reemplazar a la congelación convencional especialmente cuando se intenta conservar embriones que sean sensibles a la crio preservación, como son los producidos in vitro.

 

En los últimos años la viabilidad para mejorar los embriones criopreservados se realiza a través de la adición de ciertos componentes lipídicos a los medios de cultivo, fluidificando las membranas plasmáticas de los mismos, es por esta razón que las producciones de embriones in vitro se han convertido en una de las biotecnologías reproductivas que ha alcanzado un mayor desarrollo investigativo en los últimos 20 años. En este tipo de investigación ha dado resultados favorables con la obtención de embriones de excelente calidad con bajo contenido lipídico.

 

“Contenido lipídico en embriones bovinos producidos in vitro”


Los esfuerzos por entender la biología del embrión preimplantacional sentaron las bases para la producción in vitro (PIV), manipulación y la transferencia de embriones, tomando la especie bovina como modelo para estas experiencias, con esta justificación el profesor Francisco Báez, detalla  el proyecto subvencionado por Condes, intitulado “Contenido lipídico en embriones bovinos producidos in vitro”, el cual está enmarcado en la línea de investigación “Bases Fisiológicas de la Producción de Embriones” adscrita a la Facultad Experimental de Ciencias.

 

Para Báez, cuando se realiza las reproducciones in vivo en el animal el contenido lipídico es bastante bajo en comparación a las reproducciones que se ejecutan in vitro, quiere decir que aquella reproducción que se realiza desde un laboratorio debe efectuarse en condiciones muy particulares para lograr el resultado deseado.

 

Es por ello que para el investigador responsable, actualmente la mejora en la producción in vitro en bovinos pasa porque el calentamiento de los embriones se efectúa en un solo paso, lo cual simplifica el proceso de vitrificación, permite además que la transferencia de embriones se realice de manera directa acortando el tiempo de la investigación.

 

 

 

El objetivo de ésta investigación, así lo considera Báez, es obtener embriones de excelentes calidad sin que sean congelables, ya que los lípidos en bajas temperaturas al punto de congelación no se llevan muy bien, por ello se quiere desarrollar embriones con bajos contenidos lipídicos para que sean congelables y posteriormente puedan ser transferidos a una hembra receptora.

 

Primeramente, así nos indica Báez, los ovocitos obtenidos se recuperan a partir de ovarios de mataderos sea de una hembra bovina post mortem o de hembras vivas mediante punción transvaginal las cuales se introducen en un recipiente totalmente hermético para evitar cualquier contaminación, estos ovocitos son llevados a Laboratorio para la realización del proceso  in vitro.

 

Según nos explica el investigador, el buen proceso de esta fecundación es propicio para el desarrollo de medios de cultivos muy enriquecidos con proteínas, lípidos y suero fetal que contiene gran cantidad de lípidos y azúcares de la cual el embrión los incorpora y los hace menos competentes para este proceso, y a su vez menos crio tolerantes, eso es lo que percibe ese embrión, la cual se desarrolla en una excelente calidad que almacene menor cantidad de gotas lipídicas y en un futuro sean congelables y puedan ser transferidos posteriormente a una vaca receptora, de la cual nacerá un becerro en buenas condiciones de salud.

 

Con las condiciones particulares de la ejecución in vitro, simulará lo que suceda dentro del bovino mediante el proceso de la fecundación, toda esta simulación se efectúa dentro del Laboratorio de Citogenética de la Facultad de Ciencias Experimentales de esta casa de estudios bajo condiciones de temperaturas, pH, con poca luminosidad y que traten con ovocitos de muy buena calidad, para obtener embriones de una mejor calidad a futuro.

 

Pasos para la fertilización in vitro

 

Obtención de Ovocitos: Este proceso inicia desde la llegada de la muestra de ovocitos de hembras sacrificadas o por la técnica de punción vaginal que se les realiza in vivo, las cuales son transportadas al Laboratorio de Citogenética muestra para la elaboración del proceso in vitro.

 

Maduración in vitro de Ovocitos: Se maduran los ovocitos hasta que tenga un desarrollo adecuado en aproximadamente 24 horas con ayudas de hormonas y factores de crecimiento, pasadas las primeras 24 horas se ponen en contacto con los espermatozoides bovinos de toros congelados de las cuales se espera unas 17 horas todo esto bajo una incubadora dióxido de carbono (CO2) con aire saturado de humedad al 5 %, mientras trascurre ese tiempo determinado son removidas los excesos de células adheridas, así como también el exceso de espermatozoide, luego se lavan para ser llevados al medio de cultivo (en medio soft) que es el medio de fluido sintético virutal, de allí transcurrirán 7 días para obtener los embriones como tal.

 

 

Fecundación in vitro: En este proceso es cuando se someten la muestra de embriones a descongelación, la cual se realiza en el Laboratorio, éste se debe respandir, es decir, colocarlo en suficiente agua, aumentar el volumen y eclosionar, si en ese proceso el embrión sale durante las primeras 2 a 48 horas de esa zona prelucida, quiere decir que pudo sobrevivir al proceso embrionario después de la descongelación.

 

Báez menciona que las herramientas utilizadas para este procedimiento son de biotecnología animal, como instrumento global, de la cual puede generarse el cultivo in vitro, que es la simulación de la fecundación que sucede dentro del vientre del animal.

 

Según el investigador responsable, la temperatura ideal del ovocito es la temperatura del animal que oscila entre los 35 y 38.5 grados centígrados, en cuanto a la apariencia de ovocitos debe ser un ovocito con citoplasma homogéneo y con más de 3 capas celulares se logra ver en la lupa del microscopio, una vez realizada esta técnica de selección de los ovocitos, se llevan hasta la lupa del microscopio para seleccionar aquellos que completen más de 3 capas celulares de cúmulo y un citoplasma homogéneo, mientras que los ovocitos que no cumplan con estas características son desechados.

 

Este proceso finaliza con la transferencia de embriones, también llamado “Inseminación de Embriones en Bovinos” la cual se realiza en campo, para ese momento se debe sincronizar y preparar al animal para que pueda recibir el embrión.

 

Existe además la técnica de Calidad Embrionaria, continua el invetsigador,  que son tinciones fluorescentes, este procedimiento se ejecuta para determinar si hubo o no muerte celular programada o apoptosis que permite contar el número de células de ese embrión.

 

Gracias al proyecto, destaca el investigador, se perfeccionan técnicas sobre la reproducción in vitro, y la ejecución de procesos dentro del campo laboral, logrando así propiciar la producción nacional obteniendo un mayor número de bovinas en etapa de preñez y un  mayor número de proteínas animal, leche y carne que son esenciales para la supervivencia de la población. En el campo educativo, se fortalece la formación del estudiante de pregrado del último semestre de la carrera de Biología.

 

 

 

El proyecto está cofinanciado por Condes, la empresa privada venezolana de Inseminación Artificial C.A (Viartica) la cual les provee de insumos para la ejecución del proyecto y autofinanciamiento del mismo investigador

 

Con este proyecto de investigación, el investigador responsable del proyecto Condes  Francisco Báez espera mejorar la calidad morfológica de los embriones bovinos producidos in vitro, la cual se viene trabajando desde varios años en obtener embriones de excelente calidad con bajo contenido lipídico que en un futuro cercano puedan ser embriones totalmente crio tolerantes, además contribuirá con el establecimiento de esta biotecnología reproductiva en la ganadería de doble propósito en el Estado Zulia.




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